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標(biāo)準(zhǔn)類別：NY-行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（農(nóng)業(yè)）

　　關(guān)鍵詞：微生物肥料

　　標(biāo)準(zhǔn)號：NY227—94

　　標(biāo)準(zhǔn)名稱：微生物肥料*

　　標(biāo)準(zhǔn)分類：農(nóng)業(yè)土壤化肥標(biāo)準(zhǔn)

　　頒布部門：

　　頒布日期：

　　實施日期：

　　========================================================

　　1主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物肥料產(chǎn)品的分類、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、包裝、標(biāo)志、運

　　輸與貯存。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于有益微生物制成的，能改善作物營養(yǎng)條件（又有刺激作用）的活體微生物肥料制品。

　　2引用標(biāo)準(zhǔn)

　　GB8172蛔蟲卵測定方法

　　GB4789大腸菌值測定方法

　　GB7468總汞測定方法

　　GB7471總鎘測定方法

　　GB7466總鉻測定方法

　　GB7485總砷測定方法

　　GB7470總鉛測定方法

　　3產(chǎn)品分類

　　31根瘤菌肥料：能在豆科植物上形成根瘤（或莖瘤），同化空氣中的氮氣，供應(yīng)豆科植物

　　的氮素營養(yǎng)。用根瘤菌屬（Rhizobium）或慢生根瘤菌屬（Bradyrhizobium）的菌株制造。

　　32固氮菌肥料：在土壤和很多作物根際中同化空氣中的氮氣，供應(yīng)作物氮素營養(yǎng)；又能

　　分泌激素刺激作物生長。用下列菌種之一制造。

　　固氮菌屬（Azotobacter）

　　氮單胞菌屬（Azomonas）

　　固氮根瘤菌屬（Azorhizobium）

　　根際聯(lián)合固氮菌：固氮螺菌屬（Azospirillum）

　　陰溝腸桿菌（Enterobactercloacea）經(jīng)鑒定為非致病菌

　　糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenesfaecalis）經(jīng)鑒定為非致病菌

　　肺炎克氏桿菌（Klebsiellapneumoniae）經(jīng)鑒定為非致病菌

　　其他經(jīng)過鑒定的用于固氮菌肥料生產(chǎn)的菌種。

　　這些菌主要特征是在含一種有機碳源的無氮培養(yǎng)基中能固定分子態(tài)氮。

　　33磷細菌肥料：能把土壤中難溶性磷，轉(zhuǎn)化為作物可以利用的有效磷，改善作物磷素營

　　養(yǎng)。用下列菌種之一制造。

　　分解有機磷化合物的細菌：

　　解磷巨大芽胞桿菌（Bacillusmegatheriumphosphaticum）

　　解磷珊瑚紅賽氏桿菌（Serratiacarolleraphosphaticum）

　　節(jié)桿菌屬中的一些種（Arthrobactersp.）

　　轉(zhuǎn)化無機磷化合物的細菌：

　　假單胞菌屬中的一些種（Pseudomonassp.）

　　其他經(jīng)過鑒定的用于磷細菌肥料生產(chǎn)的菌種。

　　有機磷細菌在含磷礦粉或卵磷脂的合成培養(yǎng)基上有一定解磷作用，在麥麩發(fā)酵液中都含刺激植物生長的生長素物質(zhì)。

　　無機磷細菌具有溶解難溶性磷酸鹽的作用。

　　34硅酸鹽細菌肥料：能對土壤中云母，長石等含鉀的鋁硅酸鹽及磷灰石進行分解，釋放

　　出鉀、磷與其他灰分元素，改善作物的營養(yǎng)條件。本品的生產(chǎn)菌種為膠質(zhì)芽胞桿菌（Bacil

　　lusmucilginosus）的菌株及其他經(jīng)過鑒定的用于硅酸鹽細菌肥料生產(chǎn)的菌種。

　　該菌在含鉀長石粉的無氮培養(yǎng)基上有一定解鉀作用，菌體內(nèi)和發(fā)酵液中存在刺激植物生長的生長素物質(zhì)。

　　35復(fù)合微生物肥料：含有上述（解磷、解鉀、固氮微生物）或其他經(jīng)過鑒定的兩種以

　　上互不拮抗微生物，通過其生命活動，能增加作物營養(yǎng)供應(yīng)量。

　　4技術(shù)要求

　　41成品技術(shù)指標(biāo)1）

　　表1成品技術(shù)指標(biāo)1）

　　劑型液體固體顆粒

　　項目

　　黑褐色或褐色粉

　　1.外觀無異臭味液體褐色顆粒

　　狀、濕潤、松散

　　2有效活菌數(shù)

　　根瘤菌肥料

　　慢生根瘤菌，億/mL#511

　　快生根瘤菌，億/mL#1021

　　固氮菌肥料，億/mL#511

　　硅酸鹽細菌肥料，億/mL#1021

　　磷細菌肥料

　　有機磷細菌，億/mL#511

　　無機磷細菌，億/mL#1532

　　復(fù)合微生物肥料，億/mL#1021

　　3水分，%-20!35<10

　　4細度，mm-粒徑0.18粒徑2.5!4.5

　　5有機質(zhì)（以C計），%#2025

　�。ㄒ则问茸鳛槲絼┎辉诖肆校�

　　6pH5.5!76.0!7.56.0!7.5

　　7雜菌數(shù)，%$51520

　　8有效期不得低于六個月

　　注：1）在產(chǎn)品標(biāo)明的失效期前有效活菌數(shù)應(yīng)符合指標(biāo)要求，出廠時產(chǎn)品有效活菌數(shù)必須高出本指檔30%以上。

　　42成品無害化指標(biāo)

　　表2成品無害化指標(biāo)

　　編號參數(shù)單位標(biāo)準(zhǔn)限值

　　1.蛔蟲卵死亡率%95!100

　　2大腸桿菌值101

　　3汞及化合物（以Hg計）mg/kg$5

　　4鎘及化合物（以Cd計）mg/kg$3

　　5鉻及化合物（以Cr計）mg/kg$70

　　6砷及化合物（以As計）mg/kg$30

　　7鉛及化合物（以Pb計）mg/kg$60

　　5檢測方法

　　51外觀

　　感觀檢驗符合41成品技術(shù)指標(biāo)。

　　52有效活菌數(shù)和雜菌含量測定

　　521試劑和溶液

　　a.無菌水、蒸餾水；

　　b.選擇培養(yǎng)基（附錄A）；

　　c.剛果紅染液（0.5%）。

　　522儀器

　　a.顯微鏡1000；

　　b.搖床旋轉(zhuǎn)式200r/min；

　　c.恒溫培養(yǎng)箱；

　　d.恒溫烘干箱；

　　e.滅菌鍋；

　　f.扭力天平（分度值0.01g）；

　　g.玻璃儀器（滅菌的9cm平皿、10mL、5mL、1mL吸管、三角瓶、玻璃刮刀）。

　　523測定步驟

　　5231采樣應(yīng)不少于500g，從中稱取10!20g

　�。ň_0.01g），加入帶玻璃珠的100!

　　200mL的無菌水中（液體菌劑取10!20mL，加入90!180mL的無菌水中），靜置20min后在

　　旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。

　　5232用無菌吸管吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成110稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到11l02，11103和11104，11105等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。

　　5233用1mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1mL，加至直徑為9cm平皿的瓊脂培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面�；蛉�1mL不同稀釋度菌懸液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，與瓊脂培養(yǎng)基混勻。每個樣品取3個連續(xù)適宜稀釋度，每一稀釋度重復(fù)3次，同時加無菌水的空白對照，培養(yǎng)2!5d，每個稀釋度取5!10個菌落的菌體，涂片染色，顯微鏡觀察識別后計數(shù)菌落。

　　524計算公式：

　　統(tǒng)計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數(shù)。

　　根據(jù)式（1）和式（2）計算：

　　菌劑含菌數(shù)=菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)母液菌懸液的體積

　　菌劑數(shù)…………（1）

　　雜菌率（%）=雜菌數(shù)

　　有效菌數(shù)+雜菌數(shù)100……………………（2）

　　根據(jù)菌落特征判定，分別計算出制品中的特定微生物及雜菌數(shù)率。固體（包括顆粒）菌劑含菌數(shù)以億/g表示，液體菌劑含菌數(shù)以億/mL表示。

　　525菌落計數(shù)

　　5251以平板上出現(xiàn)30!300個菌落數(shù)的稀釋度平板為計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

　　5252當(dāng)只有一個稀釋度，其平均菌落數(shù)在30!300之間時，則以該平均菌落數(shù)乘以其稀釋倍數(shù)（見表3例1）。

　　5253若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30!300之間，應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比例小于2應(yīng)計數(shù)兩者的平均數(shù)，若大于2則計數(shù)其中稀釋較小的菌落總數(shù)（見表3例2及例3）。

　　5254若三個稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)（見表3例4）。

　　5255若三個稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)（見表3例5）。

　　5256若三個稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30!300之間，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)（見表3例6）。

　　表3計算菌落總數(shù)方法的示例

　　不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落總數(shù)

　　例次10-510-610-7菌落數(shù)之比個/mL或個/g

　　1143115922-1.6108

　　22760235311.32.7108

　　32676136342.51.4108

　　4無法計數(shù)1142312-3.1109

　　528125-2.8106

　　6無法計數(shù)30318-3.0108

　　53含水量測定

　　531儀器

　　a.土壤鋁盒；

　　b.扭力天平（分度值0.01g）；

　　c.恒溫烘干箱；

　　d.干燥器。

　　532測定步驟

　　稱取樣品30!40g

　�。ň_到0.01g）二份放入鋁盒中，于105條件下烘烤4h直至恒重，

　　取出后放入干燥器內(nèi)冷卻，一般冷卻20min，再稱其殘重和鋁盒重，損失量即為水分含量。

　　533計算公式：

　　m

　　H0-m1

　　2O%=m100……………………………………………………………（3）

　　0

　　式中：m0———表示烘干前樣品重，g；

　　m1———表示烘干后樣品重，g。

　　54pH值測定

　　541試劑和溶液

　　無離子水。

　　542儀器

　　a.燒杯；

　　b.酸度計；

　　c.扭力天平（分度值0.01g）。

　　543測定步驟

　　隨機稱取樣品8g，將樣品置于干凈燒杯內(nèi)，按12加入無離子水，浸泡振蕩均勻。預(yù)熱pH計，用標(biāo)準(zhǔn)溶液（pH6.86）校正儀器后，測定樣品懸液pH，邊測邊攪拌，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。每個樣品重復(fù)三次。

　　55細度檢驗

　　551儀器

　　a.扭力天平（分度值0.01g）；

　　b.標(biāo)準(zhǔn)篩孔徑0.18mm孔徑0.25mm。

　　552測定步驟

　　供檢樣100g，經(jīng)過105烘干1h，過孔徑018mm標(biāo)準(zhǔn)篩，篩下部分占檢樣重量#80%，其他部分全部通過孔徑025mm篩，即為合格。

　　56有機質(zhì)測定

　　561儀器

　　a.瓷坩堝；

　　b.烘箱；

　　c.高溫電爐；

　　d.干燥器；

　　e.扭力天平（分度值0.01g）。

　　562測定步驟

　　采用灼燒減重法測定。稱取樣品10g，置已稱重的瓷坩堝中于60烘箱中烘4!6h，冷卻稱重（m0）。然后在550!600高溫電爐中灼燒2h，用坩堝鉗取至干燥器中，放冷至室溫，稱重（m1）。

　　563計算公式

　　有機質(zhì)m

　　%=0-m1

　　m100…………………………（4）

　　式中：m0———表示坩堝加烘干樣品重，g；

　　m1———表示坩堝加灼燒后樣品重，g；

　　m———表示風(fēng)干后樣品重，g。

　　57有毒物質(zhì)（重金屬）的測定

　　571汞

　　按GB7468操作。

　　572鎘

　　按GB7471操作。

　　573鉻

　　按GB7466操作。

　　574砷

　　按GB7485操作。

　　575鉛

　　按GB7470操作。

　　58蛔蟲卵的測定

　　按GB8172操作。

　　59大腸菌值的測定

　　按GB4789操作。

　　6檢驗規(guī)則

　　61生產(chǎn)微生物肥料所使用的菌種，須在本標(biāo)準(zhǔn)菌種規(guī)定范圍之內(nèi)。若使用規(guī)定之外的菌種，必須經(jīng)過國家級科研單位的鑒定，包括菌種屬及種的學(xué)名，形態(tài)，生理生化特性，效力，安全性等完整資料。以杜絕一切植物檢疫對象，傳染病病源作為菌種生產(chǎn)的產(chǎn)品。

　　62本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中的成品無害化指標(biāo)和有效活菌數(shù)、雜菌數(shù)及有效期，是微生物肥料質(zhì)量安全、有效的重要依據(jù)，一切微生物肥料的產(chǎn)品必須達到的指標(biāo)。成品無害化檢驗可委托省市以上環(huán)境監(jiān)測機構(gòu)進行，并提供檢驗證明。有效活菌數(shù)、雜菌數(shù)，由農(nóng)業(yè)部指定檢測機構(gòu)檢驗。本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的外觀、水分、細度、有機質(zhì)和pH值等指標(biāo)，作為微生物肥料質(zhì)量檢驗參考指標(biāo)。

　　63復(fù)合微生物肥料，是指兩種以上微生物菌種的復(fù)合。不論使用何種微生物菌種、幾種菌種生產(chǎn)，其菌種必須符合本標(biāo)準(zhǔn)（6.1）規(guī)定。而且有效活菌數(shù)：液體型不得低于10億/mL固體型不得低于2億/g，顆粒型不得低于1億/g。復(fù)合微生物肥料的成分中，除主體微生物外，含有其他基質(zhì)成分的，其基質(zhì)成分應(yīng)有利于微生物肥料中的菌體生存，絕不能降低或抑制菌體的存活。因加基質(zhì)成分過多、不當(dāng)，微生物肥料有效活菌數(shù)過低或有效活菌數(shù)測不出來的而不達標(biāo)者，則該產(chǎn)品不是微生物肥料。

　　64微生物肥料應(yīng)由生產(chǎn)廠的技術(shù)檢驗部門進行檢驗，生產(chǎn)廠應(yīng)保證所有出廠的微生物肥料都達到本標(biāo)準(zhǔn)要求，每批出廠的微生物肥料都應(yīng)附有一定格式的質(zhì)量合格證明。

　　65微生物肥料按批檢驗，以每一發(fā)酵罐生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批。

　　66取樣方法，隨機抽樣，以箱或袋為抽樣單位。每批固體菌劑抽樣5!10箱。每箱中抽1袋，無菌操作取樣100g，混勻用四分法縮分到500g，供檢驗用。顆粒菌劑每批抽樣5

　　或10袋，無菌操作，每袋取樣05kg，仔細混勻后，用四分法縮分到500g，以供檢驗用。

　　液體菌劑每批抽樣5或10箱，每箱抽1瓶，無菌操作，每瓶吸取5mL一同放入無菌的三角瓶中，搖均勻，瓶上粘貼標(biāo)簽，標(biāo)明產(chǎn)品名稱、取樣日期、批號、取樣人，以供檢驗用。

　　67如果檢驗結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時，應(yīng)以加倍數(shù)量按規(guī)定選取試樣進行檢驗，如仍不

　　符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該批產(chǎn)品判為不合格。

　　7包裝、標(biāo)志、運輸與貯存

　　71微生物肥料固體菌劑內(nèi)包裝材料用聚乙烯薄膜袋，外用紙箱包裝。液體菌劑小包裝用玻璃質(zhì)疫苗瓶或塑料瓶，外包裝紙箱。顆粒菌劑用編織袋內(nèi)襯塑料薄膜袋包裝，袋口須密封牢固。

　　72包裝箱（袋）上應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、商標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)號、生產(chǎn)許可證號、生產(chǎn)廠名、廠址、生產(chǎn)日期、有效期、批號、凈重、防曬、防潮、易碎、防倒置等標(biāo)記。內(nèi)包裝袋上應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、商標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)號、有效細菌含量，研制、生產(chǎn)單位，產(chǎn)品性能及使用說明。

　　73每箱（袋）產(chǎn)品中附有產(chǎn)品合格證和使用說明書。

　　74適用于常用運輸工具，運輸過程中應(yīng)有遮蓋物，防雨淋、防日曬及35以上高溫。氣溫低于0時需用保溫車（8!10）運輸。輕裝輕卸，避免破損。

　　75微生物肥料應(yīng)貯存在常溫、陰涼、干燥、通風(fēng)的庫房內(nèi)，不得露天堆放，以防雨淋和日曬，防止長時間35以上高溫。碼放高度$130cm。

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